四川大学学报(医学版)

2017, v.48(05) 699-704

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miR-133b调控GSTP1表达降低结肠肿瘤细胞在低营养环境下的生存能力
Viability of Colon Tumor Cells in Insufficient-nutritional Condition is Reduced by MiR-133b Through Regulating Expression of GSTP1

李昂;杨川;胡敏;

摘要(Abstract):

目的探究GSTP1在不同阶段结肠癌组织中的表达水平,并查找可能对GSTP1表达产生调控作用的微小分子RNA(miR)及其对结肠肿瘤细胞的影响。方法利用实时定量PCR和蛋白印迹分析检测GSTP1在结肠癌组织中的表达水平;构建载体pcDNA3.1-GSTP1并转染到培养的人类结肠癌细胞系HCT116中,检测细胞的凋亡率与活性水平;利用TargetScan和MicroCosm Targets程序分析GSTP1的3′UTR序列并查找能够结合GSTP1的miR,构建载体pGL3-GSTP1-3′UTR,共转染该miR与pGL3-GSTP1-3′UTR到人类肾脏上皮细胞系HEK293中,荧光素酶报告分析验证该miR对GSTP1表达的靶向调控作用;转染该miR到HCT116中,检测GSTP1表达水平与细胞的活性氧(ROS)水平;共转染该miR与pcDNA3.1-GSTP1到HCT116中,检测细胞的ROS水平与活性水平。结果GSTP1在不同阶段结肠癌样本中的表达水平均上升,在低营养环境下,高表达GSTP1的HCT116细胞凋亡率下降,细胞活性上升。而miR-133b在GSTP1的3′UTR序列区域有特异性结合位点,在转录后水平下调GSTP1的表达。在低营养环境下,过表达miR-133b的HCT116细胞活性水平显著下降,ROS水平显著上升;在正常营养环境下,高表达miR-133b无显著影响。此外,在低营养环境下,过表达miR-133b的HCT116细胞同时过表达GSTP1,则细胞活性水平下降程度和ROS水平上升程度均减小。结论低营养环境下miR-133b能够通过对GSTP1的抑制作用削弱结肠肿瘤细胞的生存能力。

关键词(KeyWords): GSTP1;;miR-133b;;结直肠癌;;低营养环境

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation):

作者(Author): 李昂;杨川;胡敏;

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